Johdanto
Epäsuoraa laskentamenetelmää kutsutaan myös elävien bakteerien laskentamenetelmäksi. Sen periaate on, että jokainen elävä bakteeri voi kasvaa muodostaen pesäkkeen sopivassa alustassa ja hyvissä kasvuolosuhteissa. Laimenna testattava näyte 10-kertaisilla laimennoksilla ja valitse sitten kolme bakteeriliuoksen laimennusta, ota vastaavasti 0,2 ml steriilille levylle, kaada sitten sopiva määrä sulatettua ja noin 45 ℃:n lämpötilaan jäähdytettyä alustaa ja bakteerit Kun neste on sekoitettu, jäähdytetty ja jähmettynyt, laita se inkubaattoriin tai kasvihuoneeseen sopivaan lämpötilaan viljelyä varten ja laske bakteerit niiden kasvattua.
Esimerkkejä
Elävien solujen lukumäärä millilitrassa alkuperäistä bakteeriliuosta = enemmän kuin kolme toistuvaa levyä samalla laimennustasolla
pesäkkeiden keskimääräinen lukumäärä × laimennuskerroin × 5
Tällä menetelmällä voidaan myös ottaa 0,2 ml laimennettua bakteeriliuosta ja lisätä se valmistettuun levyyn ja levittää sitten steriilillä levittimellä bakteeriliuos levyn koko pinnalle, laittaa se sopivaan lämpötilaan viljelyä varten ja laskea pesäkkeiden lukumäärä ja laske sitten elinkelpoisten bakteerien kokonaismäärä millilitrassa alkuperäistä bakteerinestettä yllä olevan kaavan mukaisesti.
Menetelmä
Tämä menetelmä voi aiheuttaa saastumista ammattitaidottomasta toiminnasta tai aiheuttaa epävakaita tuloksia väliaineen liiallisesta lämpötilasta ja solujen vaurioista johtuen. Kuitenkin, koska tällä menetelmällä voidaan mitata mikrobimäärää näytteestä, se on silti tehokas menetelmä opetuksessa, tieteellisessä tutkimuksessa ja tuotannossa yleisesti käytetyn bakteerimäärän mittaamiseen. Tällä menetelmällä voidaan määrittää maaperän, veden, maidon, ruoan ja muiden materiaalien sisältämien bakteerien, hiivojen, silmujen ja itiöiden määrä. Mutta se ei sovellu rihmamaisten mikro-organismien, kuten aktinomykeettien tai rihmasienten tai rihmasyanobakteerien ja muiden kasvullisten kappaleiden mittaamiseen näytteissä.
Edellä mainittujen kahden yleisesti käytetyn laskentamenetelmän lisäksi on olemassa kalvosuodatusmenetelmä ja turbidimetrinen menetelmä. Kalvosuodatusmenetelmänä on ohjata tietty määrä järvivettä, merivettä tai juomavettä kalvosuodattimen läpi, kun bakteerien määrä näytteessä on hyvin pieni. Sitten suodatinkalvo kuivataan, värjätään ja käsitellään kalvon tekemiseksi läpinäkyväksi, ja sitten kalvolla (tai tietyllä alueella) olevien bakteerien lukumäärä lasketaan mikroskoopilla; turbidimetrian periaate on, että solupitoisuus bakteerisuspensiossa on tietyllä alueella. Sameus on suoraan verrannollinen optiseen tiheyteen. Mitä enemmän bakteereja, sitä suurempi optinen tiheys. Siksi spektrofotometrin avulla voidaan tietyllä aallonpituudella mitata bakteerisuspension optinen tiheys ja optista tiheyttä (O.D.) käytetään ilmaisemaan bakteerien määrä. Kokeellinen mittaus on ohjattava lineaarisella alueella, jossa bakteeripitoisuus on verrannollinen optiseen tiheyteen, muuten se on epätarkka. Mikrobilaskentamenetelmä kehittyy nopeasti ja menetelmiä on useita, kuten nopeita, yksinkertaisia ja automatisoituja instrumentteja ja laitteita.
Yleensä se sisältää laimennuslevylaskentamenetelmän, laimennusnesteen laskentamenetelmän ja ohutkalvolaskentamenetelmän.