Korkeapainenestekromatografia Erikoispiste
Korkeapaineinen
Nestekromatografia Neste on liikkuva faasi (kutsutaan kantajanesteeksi), neste virtaa kolonnissa, ja siihen vaikuttaa vastus. Suurempi, jotta kolonnin ohittaminen onnistuisi nopeasti, kantoaine levitetään kantajanesteeseen. Yleensä jopa 150 ~ 350 × 105Pa.
High Speed
Virtausnopeus kolonnissa on paljon nopeampi kuin perinteisessä kromatografiassa, yleensä jopa 1-10 ml/min. Korkean erotuskyvyn nestekromatografian vaatima analyysiaika on paljon lyhyempi kuin klassisessa nestekromatografiassa, yleensä alle 1 tunti.
Korkea hyötysuhde
on viime aikoina tutkinut monia uusia kiinteän faasin osia, mikä parantaa huomattavasti erotustehokkuutta.
Suuri herkkyys
Suorituskykyinen nestekromatografia on laajalti käyttänyt korkean herkkyyden ilmaisinta, mikä parantaa entisestään analyysin herkkyyttä. Kuten fluoresoivan ilmaisimen herkkyys voi olla 10-11G. Lisäksi näyte on pieni, yleensä useita mikrolitraa.
Vertaa aluetta
Kaasukromatografia ja korkean suorituskyvyn nestekromatografia: Vaikka kaasukromatografialla on hyvä erotuskyky, korkea herkkyys, nopea analyysinopeus, kätevä toiminta jne. Kaasukromatografiaa on kuitenkin vaikea soveltaa teknisten olosuhteiden rajoittamia aineita, liian korkeita aineita ja huonoa lämpöstabiilisuutta on vaikea analysoida kaasukromatografisesti. Korkean suorituskyvyn nestekromatografia, niin kauan kuin näyte voidaan tehdä liuokseksi ilman kaasutusta, näyte ei rajoita sitä. Korkealle kiehumispisteelle lämpöstabiilisuus on huono, suhteellinen molekyylipaino (yli 400 tai enemmän) orgaanista ainesta (75-80 % aineiden kokonaismäärästä) voidaan periaatteessa käyttää, eristää, analysoida. Erottaminen, analyysi. Tilastojen mukaan tunnetussa yhdisteessä sitä voidaan käyttää 20 % kaasukromatografisesti ja 70 - 80 % nestekromatografisesta analyysistä.
Erotusmekanismista riippuen korkean erotuskyvyn nestekromatografia voidaan jakaa useisiin päätyyppeihin
neste-neste-jakaumakromatografia ja kemiallinen sidoskromatografia
< P> Virtausfaasi ja kiinteä faasi ovat nestemäisiä. Liikkuvan vaiheen ja kiinteän vaiheen välillä on ilmeinen rajapinta (napaisuus, kiinteän nesteen häviämisen välttäminen). Siellä on merkittävä käyttöliittymä. Kun näyte tulee kolonniin, liuennut aine jakautuu kahden faasin väliin.a. Normaalifaasineste - nestejakaumakromatografia: Liikkuvan faasin polariteetti on pienempi kuin kiinteän nesteen polariteetti.
b. käänteinen neste - nestejakaumakromatografia: Liikkuvan faasin polariteetti on suurempi kuin kiinteän nesteen polariteetti.
Neste-neste-jakaumakromatografian haitta: Vaikka liikkuvan faasin polariteettivaatimukset ovat täysin erilaiset, kiinnitysnesteessä on edelleen liukenemista virtausfaasissa; liikkuvan faasin mekaaninen vaikutus kolonnin Force kautta aiheuttaa kiinteän nestehäviön. 1970-luvun lopulla kehitetty kiinteä kemiallinen sidosfaasi (katso jälkeenpäin) voi voittaa yllä mainitut haitat, käyttöalue on laaja (70 ~ 80%).
Neste-kiinteä värispektri
Virtausfaasi on nestemäinen, kiinnittynyt adsorbenttiin (kuten silikageeliin, alumiinioksidiin jne.). Tämä erotetaan aineen adsorptiovaikutuksen mukaan. Sen toimintamekanismi on: Kun näyte tulee kolonniin, liuenneet molekyylit (X) ja liuotinmolekyylit kilpailevat adsorbentin pinta-aktiivisuuskeskuksesta (ei injektiota, kaikki adsorptioaktiivisuuskeskus on adsorboitu S) Se voidaan esittää seuraavasti:
xa + nsa ====== xa + nsm
: liuennut molekyyli XM-liikkuvassa faasissa;
SA - Liuotinmolekyyli kiinteässä faasissa;
Xa - kiinteäfaasinen liuennut molekyyli;
SM - liuotinmolekyylit virtausvaiheessa.
Kun adsorptiokilpailureaktiivisuus on tasapainossa:
k = [xa] [SM] / [xm] [SA]
in: K on adsorboitu tasapainovakio. [Keskustelu: Mitä suurempi K, sitä suurempi varattu arvo. ]
Ioninvaihtokromatografia
IEC on kiinteäfaasinen ioninvaihdin. IEC on ioniton ioni, joka perustuu ioninvaihtohartsiin, jolla on liuenneessa ionissa sama varaus liikkuvassa faasissa reversiibelin vaihdon suorittamiseksi, jonka erottaa erilainen affiniteetti vaihtoaineissa.
esimerkkinä anioninvaihtoaineena, sen vaihtoprosessi voidaan esittää seuraavasti:
x- (liuotin) + (hartsi-R4N + Cl -) === (hartsi-R4N + X -) + Cl- (liuottimessa)
Kun saldo vaihdetaan:
kx = [- R4N + X -] [cl -] / [- R4N + CL -] [x -]
Jakaumakerroin on:
dx = [- R4N + X -] / [x -] = kx [-r4n + cl -] / [CL -]
[Keskustelu: DX ja säilytysarvo]
Mikä tahansa liuottimessa ionisoituva aine voidaan yleensä erottaa ioninvaihtokromatografialla.
ioniparikromatografia
ioniparikromatografia on ioni (tai useampi), joka virtaa liuenneen aineen molekyylivarauksen ionien (jota kutsutaan ioneiksi tai anti-ioneiksi) kanssa. Faasissa tai kiinteässä faasissa se saatetaan muodostamaan hydrofobisen ionin yhdisteeseen liuenneiden ionien kanssa, mikä säätelee liuenneiden ionien retentiokäyttäytymistä. Periaate voidaan esittää seuraavalla kaavalla:
x + vesifaasi + Y-vesifaasi === x + y - Orgaaninen faasi
: x + vesifaasi - liikkuva faasi Erotetut orgaaniset ionit (tai kationi);
Y-vesifaasi - virtausfaasi, jossa on vastakkainen varaus (kuten hydroksidi, hydroksidi, hydroksiditrimetyyliammonium) );
x + y --- muodostunut ionipariyhdiste.
Kun saldo on ladattu:
kxy = [x + y-] orgaaninen faasi / [x +] vesifaasi [Y-] vesifaasi
määritelmän mukaan Jakaumakerroin on:
dx = [x + y-] orgaaninen faasi / [x +] vesifaasi = kxy [y-] vesifaasi
[keskustelu: DX ja säilytysarvon suhde]
ionikromatografia (erityisesti käänteisfaasi), joka ratkaisee vaikeasti erotettavan seoksen, kuten hapon, emäksen ja ioni-, ei-ioniseoksen, erotusongelman, erityisesti joidenkin biokemiallisten näytteiden, kuten nukleiinihappojen, nukleosidien, alkaloidien eristäminen ja huumeet.
Ionikromatografia
Ioninvaihtohartsi on kiinteäfaasinen ja elektrolyyttiliuos liikkuva faasi. Sähköä johtava ilmaisin asetetaan sähköäjohtavan ilmaisimen häiriön eliminoimiseksi elektrolyytin tausta-ioneissa virtausvaiheessa. Näytekomponentin reaktiivisuusperiaate on sama kuin ioninvaihtokromatografiassa erotuskolonnissa ja estokolonnissa.
on kiinnitetty kiinteänä faasina anioninvaihtohartsiin (R-OH), ja anioni (kuten BR-) otetaan esimerkkinä. Kun anioni BR on testattava virtausfaasilla (NaOH), tapahtuu seuraava vaihtoreaktio (eluointireaktio on vaihtoreaktion käänteinen prosessi):
estävät reaktion sarakkeessa:
R-H ++ Na + OH - === R-Na ++ H2O
R-H ++ Na + Br - === R-NA ++ H + BR-
Se voidaan nähdä suppressoimalla eluaatti veteen, jonka johtavuusarvo on pieni, tämän sähkönjohtavuuden vaikutus eliminoituu; näyteanioni BR- muuttuu vastaavaksi hapoksi H + Br -, voi olla herkkä sähkönjohtavuuden käytölle.
Ionikromatografia on paras menetelmä anionianalyysiin liuoksessa. Se on saatavana myös kationianalyysiin.
Spatiaalinen pakokaasukromatografia
Spatiaalinen pakokaasukromatografia Kiinteänä faasina se on samanlainen kuin molekyyliseula, mutta geelin huokoshalkaisija on suuri. Monet, yleensä nanometreistä satoihin nanometreihin. Liuennutta ainetta ei eroteta vuorovaikutusvoiman kahdesta vaiheesta, vaan se erotetaan molekyylikoon mukaan. Erotus liittyy vain geelin huokoskokojakaumaan ja liuenneen aineen nestetilavuuteen tai molekyylikokoon. Kun näyte on saapunut kolonniin, geelin ulkorako ja reikäakupiste voidaan virrata virtausvaiheena. Osa näytteessä olevista molekyyleistä ei pääse sisään kololeihin, joten se kulkee suoraan kolonnin läpi, kun ne näkyvät ensin kromatogrammissa, jotkut pienet molekyylit voivat tunkeutua kaikkiin kololeihin ja tunkeutua rakeisiin, nämä komponentit Retentioarvo sarake on suurin, ja viimeinen näkyy kromogrammissa.