Johdanto
vaihe-eromikroskooppi on hollantilainen tiedemies Zernike Vuonna 1935 mikroskooppia käytettiin tarkkailemaan tyytymätöntä näytettä. Elävät solut ja epätyydyttävät biologiset näytteet, johtuen solujen mikromikrorakenteen taitekertoimen ja paksuuden eroista, aallonpituus ja amplitudi eivät muutu, vain vaihe muuttuu (X-vaihe-ero), tämä vaihe-ero Ei voida havaita. Vaihe-eromikroskooppia vaihdetaan muuttamalla tätä vaihe-eroa ja hyödyntämällä valon diffraktio- ja interferenssiilmiötä, ja vaihe-ero muutetaan amplitudieroksi elävän solun ja vaurioitumattoman näytteen havainnoimiseksi. Erona vaihe-eromikroskoopin ja tavallisen mikroskoopin välillä on, että säädettävä fenketti korvataan syklisellä aukolla, tavallisen objektiivilinssin sijasta objektiivilinssillä, jossa on vaihelevy, ja teleskooppi nivelelle.
Teoreettinen perusta
vaihe-ero viittaa eroon saman valon vaiheissa väliaineen läpi, jonka taitekerroin muuttuu ja tuottaa eri tavalla. Vaihe tarkoittaa valon vaihtelun paikkaa tietyllä hetkellä. Yleisesti ottaen, koska syntyvä vaihe-ero on liian pieni testikohteen (kuten värittömän solun) vuoksi, sitä on vaikea erottaa, vasta kun ero on amplitudi (selkeä tumma ero), se voidaan erottuva. Vaihe-ero määrittää väliaineen läpi kulkevan optisen aallon taitekertoimen ja sen paksuuden välisen eron tai yhtä suuren kuin taitekertoimen ja paksuuden tulon eron (eli optisen polun eron). Vaihe-eromikroskooppi on peilitesti, jossa käytetään testin optista polkua.
Solubiologian tutkimusinstrumentteja ovat eriytetty mikroskopia, transmissioelektronimikroskooppi ja pyyhkäisytunnelielektronimikroskooppisuunnittelu tai keksitty Nobel-palkinto.
Ero
Vaihe-eromikroskoopissa on neljä erikoisrakennetta: vaihe-eropeili, rengasmaisella aukolla varustettu levysoitin, teleskooppi ja vihreä suodatin. Vihreä suodatinefekti on: pienennä valaistusvalon aallonpituusaluetta vähentäen valaistusvalon eri aallonpituuksien aiheuttamaa vaihemuutosta.
Käyttötarkoitukset
tarkkaile perustelemattomia näytteitä ja eläviä soluja.
Perusperiaate
Objektin eri osien optisen polun eron välinen ero muunnetaan amplitudiksi (valon intensiteetiksi) käyttämällä eri kohteen taitekertoimen ja paksuuden välistä eroa. kohteen rakenteelliset osat. Havaittu mikroskooppi saavutetaan keskittävällä peilillä, jossa on syklinen aukko, ja vaihe-erolinssillä, jossa on faasilevy. Käytetään pääasiassa elävien solujen tai ei-katkoutuvien kudosleikkeiden tarkkailuun, joskus sitä voidaan käyttää myös kontrastivärjäysnäytteiden puutteen havaitsemiseen.
muuttaa näkyvän valon optisen polun eron näytteen läpi ambilaatioksi, mikä lisää eri rakenteiden välistä kontrastia, jolloin erilaiset rakenteet näkyvät selvästi. Kun valo on kulkenut näytteen läpi, se viivästyy alkuperäisestä optisesta reitistä ja se viivästyy 1/4 λ:lla (aallonpituus). Jos sitä suurennetaan tai vähennetään 1/4 λ:lla, optisen reitin erosta tulee 1/2 λ, ja kaksi sädevalokuvaa on jälkiasennettu. Vahvistaa, amplitudi kasvaa tai pienenee ja kontrasti paranee. Kokoonpanossa vaihe-eromikroskooppi eroaa neljästä tavallisen optisen mikroskoopin erikoisuudesta:
1. Rengasmainen kalvo sijaitsee valonlähteen ja konsentraattorin välissä ja tehtävänä on tehdä valonheittimen läpi Laitteen valo muodostaa onton kartion, koksaa näytteeseen.
2. Vaihelevy (rengasmainen vaihelevy) Magnesiumfluoridilla päällystettyä faasilevyä voidaan viivästyttää faasilla 1/4 λ magnesiumfluoridilla päällystetyssä faasilevyssä, mikä voi viivästyttää suoran valon tai taittuneen valon vaihetta. Jaettu kahteen:
(1) a + vaihelevy: viivästetty suora kuvaus 1/4 λ, optinen aalto optisen aallon akselin lisäämisen jälkeen, amplitudi kasvaa, näytteen rakenne on kirkkaampi kuin ympäröivä väliaine, muodostaa kirkkaan ja negatiivinen kontrasti (tai negatiivinen kontrasti).
(2) B + vaihe: Viivästynyt diffraktiovalo 1 / 4λ, optinen aalto vähennetään kahden valon nivelakselin jälkeen, amplitudi on pieni, muodostaen tumman heijastuksen (tai positiivisen kontrastin), rakenne on enemmän kuin ympäröivä väliaine Tummempi.
3. Koaksiaalinen säätöteleskooppi: Jaksottaisen aukon säätökuva on täysin yhteensopiva vaihelevyn konjugaattipinnan kanssa.
Korjaushuolto
Useita ongelmia eriytetyn mikroskopian käytössä:
(1) Vaihe putosi, kun n'n saa kirkkaan ja tumman kontrastin, Vaiheen vaihto. Kun vaihe-eroa δ = 0 ei tunnisteta, kun δ:n kasvun kasvu muuttuu, tapahtuu vaiheen kääntyminen, kun δ jatkaa kasvamista tiettyyn arvoon. Kun objektiivi on 90 % korkea-absorboiva (suuri kontrasti), tämä siirtymä on noin 0,55 λ, mikä on noin 0,33 λ käytettäessä 70 %:n standardivaloa vaimentavaa arvoa. Suurempien absorptioarvojen objektiivin linssiä tulee käyttää pienten optisten teiden erottamiseen.
(2) Halo ja progressiivinen efekti tummenevat vaihemikroskoopin kuvantamisen aikana, eikä häviö ole valoa vaiheen viiveen vuoksi, mutta ei valohäviö, vaan valo kunnostuu kuvaan kone. Jakamisen tulos. Siksi pimeän alueen valo katoaa ja tummemman kohteen ympärillä näkyy kirkas halopyörä. Tämä on vaihe-eromikroskoopin haittapuoli, joka estää hienorakenteiden havainnoinnin, kun rengasmainen kalvo on kapea ja halo vakavampi. Toinen vaihe-eromikroskoopin ilmiö on asymptoottinen ilmiö, ja kun vaihe-ero havaitsee saman suuren alueen, alueen reuna pienenee alueella.
(3) Näytteen paksuuden vaikutus Kun vaihetta havaitaan, näytteen paksuuden tulee olla 5 μm tai ohuempi. Paksumpia näytteitä käytettäessä näytteen ylempi kerros on kirkas ja syvä kerros sumea. Epäselvä ja synnyttää vaihesiirtohäiriöitä ja valon sirontahäiriöitä.
(4) Kansilasin ja luistin vaikutuksen on peitettävä kansilasi, muuten syklisen aukon kirkas rengas ja vaihelevyn tumma rengas ovat vaikeasti yhteensopivia. Osittaisella havainnolla on korkeat laatuvaatimukset lasi- ja kansilevyille. Naarmun ollessa epätasainen paksuus tai epätasaisuus aiheuttaa kirkkaan renkaan vinoutumisen ja vaihehäiriöitä. Lisäluisti on liian paksu tai liian ohut, mikä tekee rengasmaisesta aukosta kirkkaan renkaan tai pienemmän.