Úvod
Metoda nepřímého počítání se také nazývá metoda počítání živých bakterií. Jeho princip spočívá v tom, že každá živá bakterie může ve vhodném médiu a dobrých růstových podmínkách růst do kolonie. Vzorek, který má být testován, nařeďte sérií 10násobných ředění a poté vyberte tři ředění roztoku bakterií, v tomto pořadí odeberte 0,2 ml na sterilní misku, poté nalijte přiměřené množství roztaveného a ochlazeného média na teplotu asi 45 °C. bakterie Po promíchání, ochlazení a ztuhnutí tekutiny ji dejte do inkubátoru nebo skleníku při teplotě vhodné pro kultivaci a po vypěstování spočítejte bakterie.
Příklady
Počet životaschopných buněk na mililitr původního bakteriálního roztoku = více než tři opakující se destičky při stejné úrovni ředění
průměrný počet kolonií × faktor ředění × 5
Touto metodou lze také odebrat 0,2 ml zředěného bakteriálního roztoku a přidat jej na připravenou plotnu a poté pomocí sterilního rozprašovače rozprostřít bakteriální roztok po celém povrchu plotny, umístit jej do vhodné teploty pro kultivaci a vypočítat počet kolonií a poté vypočítejte celkový počet životaschopných bakterií na mililitr původní bakteriální kapaliny podle výše uvedeného vzorce.
Metoda
Tato metoda může způsobit znečištění v důsledku neodborného provozu nebo způsobit nestabilní výsledky v důsledku nadměrné teploty média a poškození článků. Nicméně, protože tato metoda může měřit počet mikrobů ve vzorku, je to stále účinná metoda pro měření počtu bakterií běžně používaná ve výuce, vědeckém výzkumu a výrobě. Touto metodou lze určit množství bakterií, kvasinek, pupenů a spor obsažených v půdě, vodě, mléce, potravinách a dalších materiálech. Není však vhodný pro měření vláknitých mikroorganismů ve vzorcích, jako jsou aktinomycety nebo vláknité houby nebo vláknité sinice a další vegetativní tělesa.
Kromě výše uvedených dvou běžně používaných metod počítání existuje metoda membránové filtrace a turbidimetrická metoda. Metoda membránové filtrace spočívá v průchodu určitého objemu jezerní, mořské nebo pitné vody přes membránový filtr, když je počet bakterií ve vzorku velmi nízký. Poté se filtrační membrána vysuší, obarví a zpracuje tak, aby byla membrána průhledná, a poté se pod mikroskopem vypočítá počet bakterií na membráně (nebo v určité oblasti); princip turbidimetrie spočívá v tom, že koncentrace buněk v bakteriální suspenzi je v určitém rozmezí. Zákal je přímo úměrný optické hustotě. Čím více bakterií, tím větší optická hustota. Proto lze pomocí spektrofotometru při určité vlnové délce měřit optickou hustotu bakteriální suspenze a k vyjádření množství bakterií se používá optická hustota (O. D.). Experimentální měření musí být řízeno v lineárním rozsahu, kde je koncentrace bakterií úměrná optické hustotě, jinak bude nepřesné. Metoda počítání mikrobů se rychle vyvíjí a existují různé metody, jako jsou rychlé, jednoduché a automatizované nástroje a zařízení.
Obecně zahrnuje metodu počítání ředicí destičky, metodu počítání ředicí kapaliny a metodu počítání tenkých vrstev.