Vysokotlaká kapalinová chromatografie Speciální bod
Vysokotlaká
Kapalinová chromatografie Kapalina je mobilní fáze (označovaná jako nosná kapalina), kapalina protéká Větší, aby rychle prošel kolonou, je nosič aplikován na nosnou tekutinu. Obecně až 150 ~ 350 × 105 Pa.
High Speed
Průtok v koloně je mnohem rychlejší než u klasické chromatografie, obecně do 1 až 10 ml/min. Doba analýzy potřebná pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii je mnohem kratší než u klasické kapalinové chromatografie, obecně méně než 1 hodina.
Vysoká účinnost
nedávno prostudoval mnoho nových pevných fází, které výrazně zlepšují účinnost separace.
Vysoká citlivost
Vysoce účinná kapalinová chromatografie má široce používaný detektor s vysokou citlivostí, dále zlepšuje citlivost analýzy. Citlivost fluorescenčního detektoru může dosáhnout 10-11G. Kromě toho je vzorek malý, obvykle několik mikrolitrů.
Porovnat rozsah
Plynová chromatografie a vysokoúčinná kapalinová chromatografie: Přestože má plynová chromatografie dobrou separační schopnost, vysokou citlivost, rychlou rychlost analýzy, pohodlné ovládání atd. Je však obtížné použít plynovou chromatografii Na látky, které jsou omezeny technickými podmínkami, příliš vysoké látky a špatnou termostabilitu je obtížné analyzovat plynovou chromatografií. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie, pokud lze vzorek převést do roztoku bez zplynování, není omezena vzorkem. Pro vysoký bod varu je tepelná stabilita špatná, lze v zásadě použít relativní molekulovou hmotnost (vyšší než 400 nebo více) organické hmoty (75 % až 80 % z celkového počtu látek), izolovat, analyzovat. Separace, analýza. Podle statistik může být ve známé sloučenině použito 20 % plynové chromatografie a 70 až 80 % analýzy kapalinové chromatografie.
V závislosti na separačním mechanismu lze vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii rozdělit do několika hlavních typů
distribuční chromatografie kapalina-kapalina a chromatografie chemických vazeb
< P> Fáze toku a pevná fáze jsou kapalné. Mezi mobilní fází a fixní fází je zřejmé rozhraní (polarita, zamezení ztráty fixní tekutiny). Existuje významné rozhraní. Když vzorek vstoupí do kolony, rozpuštěná látka se rozdělí mezi dvě fáze.a. Normální fáze kapalinová - kapalinová distribuční chromatografie: Polarita mobilní fáze je menší než polarita fixované kapaliny.
b. invertovaná kapalina - kapalinová distribuční chromatografie: Polarita mobilní fáze je větší než polarita fixované kapaliny.
Nevýhoda distribuční chromatografie kapalina-kapalina: Přestože požadavky na polaritu mobilní fáze jsou zcela odlišné, fixační kapalina má stále stopy rozpuštění v průtokové fázi; mechanický dopad mobilní fáze přes kolonu Force, způsobí fixní ztrátu tekutiny. Pevná fáze chemické vazby vyvinutá na konci 70. let (viz dále), může překonat výše uvedené nevýhody, použití je široké (70 ~ 80%).
Barevné spektrum kapalina-pevná látka
Průtoková fáze je kapalná, fixovaná na adsorbent (jako je silikagel, oxid hlinitý atd.). Ten se oddělí v závislosti na adsorpčním účinku látky. Mechanismus jeho působení je: Když vzorek vstoupí do kolony, molekuly rozpuštěné látky (X) a molekuly rozpouštědla (rozpouštědel) soutěží o centrum povrchové aktivity adsorbentu (nikoli vstřikování, veškeré centrum aktivity adsorbentu adsorbováno S) Lze jej znázornit následovně:
xa + nsa ====== xa + nsm
: molekula rozpuštěné látky v XM-mobilní fázi;
SA - molekula rozpouštědla ve fixní fázi;
Xa - molekula solutu s pevnou fází;
SM - molekuly rozpouštědla v průtokové fázi.
Když je reaktivita adsorpční konkurence vyvážená:
k = [xa] [SM] / [xm] [SA]
v: K je adsorbován Rovnovážná konstanta. [Diskuse: Čím větší K, tím větší rezervovaná hodnota. ]
Iontoměničová chromatografie
IEC je iontoměnič jako pevná fáze. IEC je beziontový iont na bázi iontoměničové pryskyřice, který má rozpuštěný iont se stejným nábojem v mobilní fázi pro provádění reverzibilní výměny, která je oddělena různou afinitou ve výměnných činidlech.
jako příklad aniontového výměnného činidla lze jeho proces výměny znázornit následovně:
x- (Rozpouštědlo) + (pryskyřice-R4N + Cl -) === (pryskyřice-R4N + X -) + Cl- (v rozpouštědle)
Při výměně zůstatku:
kx = [- R4N + X -] [cl -] / [- R4N + CL -] [x -]
Distribuční koeficient je:
dx = [- R4N + X -] / [x -] = kx [-r4n + cl -] / [CL -]
[Diskuse: DX a hodnota udržení]
Jakákoli látka, která je ionizována v rozpouštědle, může být obecně separována iontoměničovou chromatografií.
chromatografie na iontových párech
chromatografie na iontových párech je ion (nebo více), který proudí s ionty (označovanými jako ionty nebo antiionty) náboje molekuly rozpuštěné látky. Ve fázi nebo fixní fázi se vytvoří hydrofobní ion na sloučeninu s rozpuštěnými ionty, čímž se řídí retenční chování rozpuštěných iontů. Princip lze znázornit následujícím vzorcem:
x + vodná fáze + Y-vodná fáze === x + y - Organická fáze
: x + vodná fáze - mobilní fáze Oddělené organické ionty (nebo kation);
Y-vodná fáze - průtoková fáze s opačným nábojem (jako je hydroxid, hydroxid, hydroxid trimethylamonium));
x + y --- vytvořená sloučenina iontového páru.
Když je váha načtena:
kxy = [x + y-] Organická fáze / [x +] vodní fáze [Y-] Vodná fáze
podle definice Distribuční koeficient je:
dx = [x + y-] organická fáze / [x +] vodná fáze = kxy [y-] vodná fáze
[diskuse: Vztah mezi DX a retenční hodnotou]
iontová chromatografie (zejména inverzní fáze), řešící problém separace směsi, která se obtížně separuje, jako je směs kyseliny, báze a iontové, neiontové směsi, zejména některé biochemické vzorky, jako je izolace nukleových kyselin, nukleosidů, alkaloidů a drogy.
Iontová chromatografie
Iontoměničová pryskyřice je pevná fáze a roztok elektrolytu je mobilní fáze. Aby se eliminovala interference vodivostního detektoru s ionty pozadí elektrolytu ve fázi toku, je nastaven elektrický vodivý detektor. Reaktivní princip složky vzorku je stejný jako u iontoměničové chromatografie na separační koloně a inhibiční koloně.
je fixován jako pevná fáze v aniontoměničové pryskyřici (R-OH) a anion (jako je BR-) je brán jako příklad. Když má být aniont BR testován s průtokovou fází (NaOH), dojde k následující výměnné reakci (eluční reakce je opačný proces výměnné reakce):
inhibovat reakci ve sloupci:
R-H ++ Na + OH - === R-Na ++ H2O
R-H ++ Na + Br - === R-NA ++ H + BR-
Je to vidět potlačením eluátu do vody s malou hodnotou vodivosti, vliv této elektrické vodivosti je eliminován; anion vzorku BR- se přemění na odpovídající kyselinu H + Br -, může být citlivý na použití elektrické vodivosti.
Iontová chromatografie je nejlepší metodou pro analýzu aniontů v roztoku. Je také k dispozici pro kationtovou analýzu.
Prostorová výfuková chromatografie
Prostorová výfuková chromatografie Jako pevná fáze je podobná molekulárnímu sítu, ale průměr pórů gelu je velký. Mnoho, obecně počty nanometrů až stovky nanometrů. Rozpuštěná látka není oddělena od dvou fází interakční síly, ale oddělena velikostí molekuly. Separace souvisí pouze s distribucí velikosti pórů gelu a objemem kapaliny nebo velikostí molekul rozpuštěné látky. Poté, co vzorek vstoupí do kolony, vnější mezera gelu a akupunktura otvoru mohou proudit jako průtoková fáze. Některé molekuly ve vzorku nelze vstoupit do kolonek, takže procházejí přímo kolonou, nejprve se objeví na chromatogramu, některé malé molekuly mohou vstoupit do všech kolonek a proniknout do granulí, tyto složky Hodnota retence na sloupec je největší a poslední se objeví na chromogramu.