Klasifikace
Epithelialtissueisdividedintocoveringepithelium,glandularepithelium,sensoryepithelium,reproductiveepithelium,myoepithelial,etc.Theepitheliumusuallyreferstothecoveringepithelium.
Epithelialcellscanbedividedintotwotypesaccordingtothenumberofcelllayers,monolayerandmulti-layer,andcolumnarandsquamousaccordingtotheirshape.
Buňky sloupcového epitelu: hlavně distribuovány v nosní dutině, nosohltanu, orgánech, plících, žaludku, střevech, děložním čípku, endometriu a vejcovodech.
Piteliální buňky šupinatých: pokrývají celou kůži, ústa, hrdlo, část nosohltanu, jícen, celou pochvu a děložní čípek. Piteliální buňky šupinatých se dělí na bazální buňky, střední buňky a povrchové buňky.
Role
Theepithelialcellsintheouterlayeroftheskinaregenerallykeratinized,whichcanprotectandabsorb.
Theepithelialcellsinthecavityarehighlydifferentiatedandhavethefunctionsofsecretion,excretionandabsorption.
Theepithelialcellsonthesurfaceofdigestiveorgans,lungsandotherorgansplayanimportantroleindigestion,absorption,andexchangeofoxygen.
Pěstování
1) Epidermální buněčná kultura
1.Materials:Takesmallpiecesofsurgicalskingraftsorsurgicalresidualskin,preferablywiththinkeratinizationlayer,andbetterskinforprematureabortioninfants,cutintosmallpiecesof0.5to1squarecentimeters.
2. Ošetření EDTA: první 0,02 % EDTA pokojová teplota po dobu 5 minut.
3. Studené trávení: Změňte na 0,25 % trypsinu a místo při 4 °Covernight.
4.Separation:Takeouttheskinandseparatetheepidermisfromthedermiswithvascularforcepsortweezers.
5. Teplé trávení: Vyjměte epidermu a ošetřete ji odděleně, nůžkami nastříhejte na menší kousky, vložte nových 0,25 % trypsinu a poté začněte trávit 37 °C po dobu 30-60 minut.
6.Useapipettetogentlypipetterepeatedlytomakeacellsuspension.
7.Culturesolution:Afterfilteringthrough80meshstainlesssteelgauze,centrifugeatlowspeed,suckthesupernatant,directlyaddEaglesolutionand20%calfserumtomakecellsuspension,inoculateitintodishes,andcultureinCO2incubator.
2)Kultura prsní tkáně
Directculturemethod:(suitableforculturingsofttissuewithlessfiber)
1.InacontainercontainingasmallamountofculturesolutionorHankssolution,useasharpbladetorepeatedlycutthetissueintopieces.
2.Pourthetissuefragmentsandliquidintothecentrifugetube,addalittleculturemedium,pipetteforawhilewithapipette,andplacethetesttuberackfor3to5minutes.Aspiratetheupperlayeroffluidtoexcludethenon-breastcellpart.Repeat2to3times.
3.Afterthelasttreatment,addculturesolutiontothesedimentationtubeandpipettealittlewithapipettetoresuspendthesediment.Withoutwaitingforthecellmasstodrop,filteritintoanothertubethrough3to4layersofsterilegauze.
4.Adjusttheappropriatedensityandinoculateitintoacultureflaskforcultivation.
Collagenasedigestionmethod:(suitableforprocessinghardtissueswithmorefibers)
Proces je stejný jako kultivace jiných tkání.
3) Kultivace žaludečních pithelových buněk
1.Collection:Takeasmallamountofmucosainthedistalnon-lesionareaofgastricspecimensfromgastriculcerorgastriccancer.
2. Čištění:Po opláchnutí roztokem obsahujícím antamicin (400 μg/ml) a amfotericin (2 μg/mlHanks), sloupněte spodní sliznici tupým nástrojem a řezte do velikosti 1 mm3.
3. Trávení: Trávení typu Ikolagenáza a hyaluronidáza při 37 °C po dobu 80 minut.
4.Centrifugation:CollectthecellsuspensionandrinsetwicewithHankssolutionafter800rpm/centrifugation.
5.Inoculation:Afterthelastcentrifugation,addacompletemediumcontaining1%to2%fetalbovineserumandinoculateitintoacultureplatewithdifferentnumbersofwells.Theamountofinoculationdependsonthepurposeoftheexperiment.
4) Hepatocytární kultura
Firstgenerationtissueblockculture:Takefreshliver,firststripoffthefibrouscomponentssuchascapsuleandbloodvessels,andcuttheliverinto1mmwithaknifeorscissors3Thesmallpiecesontheleftandrightsidesarecultivatedonthewall.
5) Endoteliální buněčná kultura
1.Takethefreshumbilicalcordafterdelivery.Ifnotcultivatedimmediately,itcanbestoredat4°C,butitshouldnotexceed12hours.Cutasectionof10-15cmlongaseptically.Otherlargebloodvessels,suchasembryosandlarvae,canalsobeusedforculture.
2.First,useathree-waysyringetoabsorbthewarmPBSsolutionandinjectitintotheveinoftheumbilicalcordtowashawaytheresidualblood.Theinjectionportshouldbeligatedwithastringtopreventliquidreflux.
3.Clamponeendoftheumbilicalcordwithavascularclamp,andslowlyinjectcollagenasewithafinalconcentrationof0.1%intotheumbilicalveinfromtheotherend.Afterliquidappearsattheend,itisligatedtofillthebloodvessel.Theinjectionportshouldalsobeligatedtopreventliquidreflux.Digestfor3-10minutes.
4.Aspiratethedigestionsolutioncontainingendothelialcellsandpouritintoacentrifugetube.Inordertogetmorecells,injectwarmPBStorinse2or3timestocompletelyremovetheremainingcells,andthenpouritintothecentrifugetubeandcentrifuge.
5.Aspiratethesupernatant,add1640culturemediumtomakeacellsuspension,inoculateitintoaflaskanddishforculture,whenitgoeswell,thecellscangrowintoamonolayerwithin2to3days.
6)Kapilární endoteliální buněčná kultura
Příprava nádorového média:
1.S-180solidsarcomatsueod C3Hmysewastaken.
2. Trypsintrávení, 15 ml Dulbeccova modifikovaného Eagleova kultivačního média (obsahujícího 10 % telecího séra), naočkováno do kultivačních baněk T-75 Falconculture.
3.Whenthecellgrowthisclosetocompleteconfluence,theculturemediumiscollectedtomakeaconditionedmedium;afteranewmediumcontaining10%calfserumisused,itisalsocollectedeverytwodaystoobtainalargeamountofconditionedculture.
4.Po 4000 otáčkách/odstředění se filtruje přes 0,22μm mikroporézní membránu a skladuje se při teplotě -20°C pro pozdější použití (před použitím rozmrazeno).