Специална точка за течна хроматография при високо налягане
Високо налягане
Течна хроматография Течността е подвижна фаза (наричана течност носител), течността протича през колона и се влияе от съпротивление По-голямо, за да премине бързо колоната, носителят се прилага към носещата течност. Обикновено до 150 ~ 350 × 105Pa.
Висока скорост
Скоростта на потока в колоната е много по-бърза от класическата хроматография, обикновено до 1 до 10 ml / min. Времето за анализ, необходимо за високоефективна течна хроматография, е много по-малко от класическата течна хроматография, обикновено по-малко от 1 час.
Висока ефективност
наскоро проучи много нови фиксирани фази, което значително подобрява ефективността на разделяне.
Висока чувствителност
Високоефективната течна хроматография има широко използван детектор с висока чувствителност, което допълнително подобрява чувствителността на анализа. Чувствителността на флуоресцентния детектор може да достигне 10-11G. Освен това пробата е малка, обикновено няколко микролитра.
Сравнете гамата
Газова хроматография и високоефективна течна хроматография: Въпреки че газовата хроматография има добра способност за разделяне, висока чувствителност, бърза скорост на анализ, удобна работа и т.н. Въпреки това е трудно да се приложи газова хроматография за вещества, които са ограничени от технически условия, вещества, които са твърде високи, и лоша термостабилност са трудни за анализ с газова хроматография. Високоефективна течна хроматография, стига пробата да се превърне в разтвор без газификация, тя не е ограничена от пробата. За високата точка на кипене термичната стабилност е лоша, относителното молекулно тегло (по-голямо от 400 или повече) органично вещество (75% до 80% от общия брой вещества) може да се използва по принцип, изолирано, анализирано. Разделяне, анализ. Според статистиката в известно съединение може да се използва за 20% чрез газова хроматография и от 70 до 80% от анализа с течна хроматография може да се използва.
В зависимост от механизма на разделяне, високоефективната течна хроматография може да бъде разделена на няколко основни типа
разпределителна хроматография течност-течност и хроматография на химически връзки
< P> Фазата на потока и неподвижната фаза са течни. Има очевидна връзка между подвижната фаза и фиксираната фаза (полярност, избягване на загубата на фиксирана течност). Има значителен интерфейс. Когато пробата влезе в колоната, разтвореното вещество се разпределя между две фази.a. Нормална фаза флуид - течна разпределителна хроматография: Полярността на подвижната фаза е по-малка от полярността на неподвижната течност.
б. обърната течно-течна разпределителна хроматография: Полярността на подвижната фаза е по-голяма от полярността на неподвижната течност.
Недостатък на разпределителната хроматография течност-течност: Въпреки че изискванията за полярност на подвижната фаза са напълно различни, фиксиращата течност все още има следи от разтваряне във фазата на потока; механичното въздействие на подвижната фаза през колоната Сила, това ще доведе до фиксирана загуба на течност. Фиксираната фаза на химическото свързване, разработена в края на 70-те години на миналия век (вижте след разглеждане), може да преодолее горните недостатъци, приложението е широко (70 ~ 80%).
Течно-твърд цветен спектър
Фазата на потока е течна, фиксирана към адсорбента (като силикагел, алуминиев оксид и др.). Това се разделя в зависимост от ефекта на адсорбция на веществото. Неговият механизъм на действие е: Когато пробата навлезе в колоната, молекулите на разтвореното вещество (X) и молекулите на разтворителя (ите) се конкурират за центъра на повърхностната активност на адсорбента (не инжектиране, целият център на активност на адсорбента е адсорбиран S). Може да се представи по следния начин:
xa + nsa ====== xa + nsm
: молекулата на разтвореното вещество в XM-мобилна фаза;
SA - Молекула на разтворителя във фиксирана фаза;
Xa - молекула на разтвореното вещество с фиксирана фаза;
SM - молекули на разтворителя във фазата на потока.
Когато адсорбционната конкурентна реактивност е балансирана:
k = [xa] [SM] / [xm] [SA]
в: K е адсорбирана константа на равновесие. [Дискусия: Колкото по-голямо е K, толкова по-голяма е запазената стойност. ]
Йонообменна хроматография
IEC е йонообменник като фиксирана фаза. IEC е йон без йони, базиран на йонообменна смола, за да има разтворен йон със същия заряд в подвижната фаза за извършване на обратим обмен, който е разделен от различен афинитет в обменните агенти.
като анионобменен агент като пример, неговият обменен процес може да бъде представен по следния начин:
x-(Разтворител) + (смола-R4N + Cl -) === (смола-R4N + X -) + Cl- (в разтворител)
При обмен на баланс:
kx = [- R4N + X -] [cl -] / [- R4N + CL -] [x -]
Коефициентът на разпределение е:
dx = [- R4N + X -] / [x -] = kx [-r4n + cl -] / [CL -]
[Дискусия: DX и стойност на задържане]
Всяко вещество, което се йонизира в разтворителя, обикновено може да бъде разделено чрез йонообменна хроматография.
Хроматография на йонна двойка
Хроматографията на йонна двойка е йон (или повече), който протича с йони (наричани йони или анти-йони) от заряда на молекулата на разтвореното вещество. Във фазата или фиксираната фаза се образува хидрофобен йон към съединението с разтворените йони, като по този начин се контролира поведението на задържане на разтворените йони. Принципът може да бъде представен със следната формула:
x + водна фаза + Y-водна фаза === x + y - Органична фаза
: x + водна фаза - подвижна фаза Отделени органични йони (или катиони);
Y-водна фаза - фаза на потока с противоположен заряд (като хидроксид, хидроксид, триметиламониев хидроксид));
x + y --- съединение с образувана йонна двойка.
Когато балансът е зареден:
kxy = [x + y-] Органична фаза / [x +] водна фаза [Y-] Водна фаза
според определението Коефициентът на разпределение е:
dx = [x + y-] органична фаза / [x +] водна фаза = kxy [y-] водна фаза
[дискусия: DX и връзката на стойността на задържане]
йонна хроматография (особено обратна фаза), решаване на проблема с разделянето на сместа, която е трудна за разделяне, като киселина, основа и йонна, нейонна смес, особено някои биохимични проби като изолиране на нуклеинови киселини, нуклеозиди, алкалоиди , и наркотици.
Йонна хроматография
Йонообменната смола е фиксирана фаза, а електролитният разтвор е подвижна фаза. За да се елиминира намесата на детектора за проводимост в фоновите йони на електролита във фазата на потока, се настройва електропроводимият детектор. Реактивният принцип на компонента на пробата е същият като йонообменната хроматография на разделителната колона и инхибиторната колона.
се фиксира като фиксирана фаза в анионобменна смола (R-OH), а анионът (като BR-) се взема като пример. Когато анионният BR трябва да се тества с фазата на потока (NaOH), възниква следната реакция на обмен (реакцията на елуиране е обратният процес на реакцията на обмен):
инхибира реакцията в колоната:
R-H ++ Na + OH - === R-Na ++ H2O
R-H ++ Na + Br - === R-NA ++ H + BR-
Може да се види чрез потискане на елуата във вода с малка стойност на проводимост, ефектът от тази електрическа проводимост се елиминира; пробата анион BR- се превръща в съответната киселина H + Br -, може да бъде чувствителен към използването на електрическа проводимост.
Йонната хроматография е най-добрият метод за анионен анализ в разтвора. Предлага се и за катионен анализ.
Пространствена изпускателна хроматография
Пространствена изпускателна хроматография Като фиксирана фаза тя е подобна на молекулярното сито, но диаметърът на порите на гела е голям. Много, обикновено числа от нанометри до стотици нанометри. Разтвореното вещество не се отделя от двете фази на силата на взаимодействие, а се разделя от размера на молекулата. Разделянето е свързано само с разпределението на размера на порите на гела и обема на течността или размера на молекулата на разтвореното вещество. След като пробата навлезе в колоната, външната междина на гела и акупунктурната точка на дупката могат да се източат като фаза на потока. Някои от молекулите в пробата не могат да бъдат въведени в кололите, така че тя преминава директно през колоната, появявайки се първо на хроматограмата, някои малки молекули могат да влязат във всички кололи и да проникнат в гранулите, тези компоненти Стойността на задържане на колоната е най-голямата и последната се появява на хромограмата.