Принцип на оцветяване
Gram staining all bacteria can be divided into gram-positive bacteria (G + ) and Gram-negative bacteria ( G - ) two categories, is the most commonly used bacteriological staining identification. The reason for staining bacteria can be divided into G + bacteria and G - bacteria, is generally believed that because the Gram stain is based on special chemical components of bacterial cell walls were stained of.
и чрез протравяване след първоначална трансфекция, клетките образуват водонеразтворим макромолекулен кристален виолетово-йоден комплекс. Поради дебелото съдържание на пептидогликан в клетъчната стена на грам-положителните бактерии и по-високата степен на омрежване на молекули, които по-тясно, така че когато се елуират с етанол, пептидогликановата клетъчна дехидратация поради значително свиване, съчетана със значителното съдържание на липиди, не може да се разтвори в стените на слотовете на етанола, като по този начин, кристално виолетовият и йодният комплекс остават здраво задържани в клетъчната стена, той се представя лилаво. Грам-отрицателните бактерии поради тънката стена и ниското съдържание на омрежен пептидогликан се разхлабват, така че след случая на етанол, пептидогликановата мрежа трудно се свива и, съчетано с високото съдържание на липиди, така че след като липидът се разтвори в етанол, голямата празнина ще се появи в клетъчната стена, комплексът на клетъчната стена се елуира лесно, по този начин от етанол след избелване и безцветни клетки. След това отново оцветените с червено багрило грам-отрицателни бактерии ще получат нов слой цвят - червен, докато грам-положителните бактерии все още са в лилаво.
оперативен поток
Методът на оцветяване по Грам обикновено включва четири стъпки Първо боядисване, оцветяване, избелване, оцветяване и специфични методи на работа са:
(1) производители.
взетите конвенционални намазки семенната култура се изсушава, фиксира.
използване на активен растеж на млади култури като оцветяване по Грам; намазката не трябва да е твърде дебела, за да се избегне фалшив положителен резултат от непълно избелване; фиксиращ пламък не прегрява (горещ не е подходящ за плъзгане).
(2) Първо багрило.
кристално виолетово се добавя на капки (само за да покрие подходящия филм от пеликула), оцветяване 1-2 минути, промито с вода.
(3) стъргач.
до остатъците с помощта на йодна вода, измити и обработени с йодно покритие за около 1 минута, измиване с вода.
(4) избелване.
остатъчна вода върху филтърна хартия за засмукване на предметното стъкло, наклонени предметни стъкла, на бял фон, с капкомер струя етанол, избелване плюс 95% етанол, докато спре лилавото изтичане, незабавно измито с вода.
избелването с етанол е ключът към операциите по оцветяване по Грам: липса на избелване, фалшиво-отрицателните бактерии са оцветени положителни бактерии; прекомерно избелване, фалшиво положителни бактерии са боядисани отрицателни бактерии. По този начин времето за избелване обикновено е 20-30s.
(5) контрастно оцветяване.
бяха оцветени със Safranin около 2 минути, промити с вода.
(6) микроскопско изследване.
След изсушаване маслен микроскоп. Клетките бяха оцветени в синьо-лилаво за грам-положителни бактерии, боядисани в червено за грам-отрицателни бактерии.
Често срещани видове
често срещани грам-положителни бактерии Staphylococcus (Staphylococcus), Streptococcus (Streptococcus), Streptococcus pneumoniae, Bacillus anthracis, дифтерия, тетанус и др.
обикновена грам-отрицателна бактерия Shigella, Salmonella typhi, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella pertussis и Vibrio cholera и meningococcus.
Главна роля
Значението на оцветяването по Грам се крие в идентифицирането на бактерии, много от бактериите са разделени на две категории, Грам-положителни и Грам-отрицателни бактерии.
при лечението на повечето грам-положителни бактерии са чувствителни към пеницилин (пеницилин-нечувствителни Mycobacterium tuberculosis): Повечето пиогенни бактерии принадлежат към грам-положителните бактерии, така че те могат да произвеждат екзотоксин, патогенен за хората, можете да изберете семейство пеницилин, като цефтриаксон .
Грам-отрицателни бактерии, повечето от чревните бактерии са предимно грам-отрицателни бактерии, които произвеждат ендотоксини, разчитат на ендотоксина, който разболява хората. Грам-отрицателни бактерии и не е чувствителен към пеницилин (но Neisseria meningitidis е менингококов менингит и гонорея, чувствителни към пеницилин), могат да бъдат избрани флуорохинолони като норфлоксацин, левофлоксацин, също така можете да изберете макролиди като кларитромицин, рокситромицин. И така, първите, които разграничават патогенните бактерии, са грам-положителните бактерии или отрицателните бактерии, предпочитаният антибиотик от гледна точка на голямо значение.