Класификация
Epithelialtissueisdividedintocoveringepithelium,glandularepithelium,sensoryepithelium,reproductiveepithelium,myoepithelial,etc.Theepitheliumusuallyreferstothecoveringepithelium.
Epithelialcellscanbedividedintotwotypesaccordingtothenumberofcelllayers,monolayerandmulti-layer,andcolumnarandsquamousaccordingtotheirshape.
Колонни репителни клетки: разпространени главно в носната кухина, назофаринкса, органите, белите дробове, стомаха, червата, шийката на матката, ендометриума и фалопиевите тръби.
Плоскоклетъчни епителни клетки: покриват кожата на цялото тяло, устата, гърлото, част от назофаринкса, хранопровода, цялата вагина и шийката на матката. Плоскоклетъчните епителни клетки са разделени на базални клетки, средни клетки и повърхностни клетки.
Роля
Theepithelialcellsintheouterlayeroftheskinaregenerallykeratinized,whichcanprotectandabsorb.
Theepithelialcellsinthecavityarehighlydifferentiatedandhavethefunctionsofsecretion,excretionandabsorption.
Theepithelialcellsonthesurfaceofdigestiveorgans,lungsandotherorgansplayanimportantroleindigestion,absorption,andexchangeofoxygen.
Култивиране
1) Култура от епидермални клетки
1.Materials:Takesmallpiecesofsurgicalskingraftsorsurgicalresidualskin,preferablywiththinkeratinizationlayer,andbetterskinforprematureabortioninfants,cutintosmallpiecesof0.5to1squarecentimeters.
2. Обработка с EDTA: първо пуснете 0,02% EDTA при стайна температура за 5 минути.
3. Студено храносмилане: Променете на 0,25% трипсин и поставете на 4° за една нощ.
4.Separation:Takeouttheskinandseparatetheepidermisfromthedermiswithvascularforcepsortweezers.
5.Топло храносмилане: Извадете епидермиса и го третирайте отделно, нарежете на по-малки парчета с ножица, нанесете нов 0,25% трипсин и след това храносмилайте при 37°C за 30-60 минути.
6.Useapipettetogentlypipetterepeatedlytomakeacellsuspension.
7.Culturesolution:Afterfilteringthrough80meshstainlesssteelgauze,centrifugeatlowspeed,suckthesupernatant,directlyaddEaglesolutionand20%calfserumtomakecellsuspension,inoculateitintodishes,andcultureinCO2incubator.
2) Култура на гръдната тъкан
Directculturemethod:(suitableforculturingsofttissuewithlessfiber)
1.InacontainercontainingasmallamountofculturesolutionorHankssolution,useasharpbladetorepeatedlycutthetissueintopieces.
2.Pourthetissuefragmentsandliquidintothecentrifugetube,addalittleculturemedium,pipetteforawhilewithapipette,andplacethetesttuberackfor3to5minutes.Aspiratetheupperlayeroffluidtoexcludethenon-breastcellpart.Repeat2to3times.
3.Afterthelasttreatment,addculturesolutiontothesedimentationtubeandpipettealittlewithapipettetoresuspendthesediment.Withoutwaitingforthecellmasstodrop,filteritintoanothertubethrough3to4layersofsterilegauze.
4.Adjusttheappropriatedensityandinoculateitintoacultureflaskforcultivation.
Collagenasedigestionmethod:(suitableforprocessinghardtissueswithmorefibers)
Процесът е същият като култивирането на други тъкани.
3) Култура от епителни клетки на стомаха
1.Collection:Takeasmallamountofmucosainthedistalnon-lesionareaofgastricspecimensfromgastriculcerorgastriccancer.
2. Почистване: След изплакване с разтвор, съдържащ гентамицин (400 μg/ml) и амфотерицин (2 μg/ml Hanks), отлепете долната лигавица с тъп инструмент и изрежете до размер 1 mm3.
3. Храносмилане: Храносмилане тип колагеназа и хиалуронида при 37°C за 80 минути.
4.Centrifugation:CollectthecellsuspensionandrinsetwicewithHankssolutionafter800rpm/centrifugation.
5.Inoculation:Afterthelastcentrifugation,addacompletemediumcontaining1%to2%fetalbovineserumandinoculateitintoacultureplatewithdifferentnumbersofwells.Theamountofinoculationdependsonthepurposeoftheexperiment.
4)Хепатоцитна култура
Firstgenerationtissueblockculture:Takefreshliver,firststripoffthefibrouscomponentssuchascapsuleandbloodvessels,andcuttheliverinto1mmwithaknifeorscissors3Thesmallpiecesontheleftandrightsidesarecultivatedonthewall.
5)Култура на ендотелни клетки
1.Takethefreshumbilicalcordafterdelivery.Ifnotcultivatedimmediately,itcanbestoredat4°C,butitshouldnotexceed12hours.Cutasectionof10-15cmlongaseptically.Otherlargebloodvessels,suchasembryosandlarvae,canalsobeusedforculture.
2.First,useathree-waysyringetoabsorbthewarmPBSsolutionandinjectitintotheveinoftheumbilicalcordtowashawaytheresidualblood.Theinjectionportshouldbeligatedwithastringtopreventliquidreflux.
3.Clamponeendoftheumbilicalcordwithavascularclamp,andslowlyinjectcollagenasewithafinalconcentrationof0.1%intotheumbilicalveinfromtheotherend.Afterliquidappearsattheend,itisligatedtofillthebloodvessel.Theinjectionportshouldalsobeligatedtopreventliquidreflux.Digestfor3-10minutes.
4.Aspiratethedigestionsolutioncontainingendothelialcellsandpouritintoacentrifugetube.Inordertogetmorecells,injectwarmPBStorinse2or3timestocompletelyremovetheremainingcells,andthenpouritintothecentrifugetubeandcentrifuge.
5.Aspiratethesupernatant,add1640culturemediumtomakeacellsuspension,inoculateitintoaflaskanddishforculture,whenitgoeswell,thecellscangrowintoamonolayerwithin2to3days.
6) Култура на капилярни ендотелни клетки
Приготвяне на туморно кондиционирана среда:
1.S-180твърда саркома тъкан от C3H мишка беше взета.
2.Трипсис на лошо храносмилане, 15 ml модифициран културен препарат на Dulbecco Eagle (съдържащ 10% телешки серум), инокулиран в T-75 Falconculture колби за култура.
3.Whenthecellgrowthisclosetocompleteconfluence,theculturemediumiscollectedtomakeaconditionedmedium;afteranewmediumcontaining10%calfserumisused,itisalsocollectedeverytwodaystoobtainalargeamountofconditionedculture.
4. След 4000 оборота/центрофугиране се филтрира през 0,22 μm микропореста мембрана и се съхранява при -20°C за по-късна употреба (размразена преди употреба).