Въведение
Микроскопът с фазова разлика е холандският учен Зернике през 1935 г., микроскопът, използван за наблюдение на неудовлетворения образец. Живи клетки и незадоволителни биологични образци, поради разликата в коефициента на пречупване и дебелината на микро-микроструктурата на клетките, дължината на вълната и амплитудата не се променят, само фазовите промени (фазова разлика X), тази фазова разлика не може да се наблюдава. Микроскопът с фазова разлика се променя чрез промяна на тази фазова разлика и използване на дифракция на светлината и феномен на интерференция, а фазовата разлика се променя на амплитудната разлика, за да се наблюдават живата клетка и недефектирания образец. Разликата между микроскопа с фазова разлика и обикновения микроскоп е да замени променливия фенкет с циклична апертура, вместо обикновената леща на обектива с обективна леща с фазова плоча и телескоп за съединение.
Теоретична основа
фазовата разлика се отнася до разлика във фазата на една и съща светлина през среда, която има различни промени в индекса на пречупване и произвежда. Фазата се отнася до позицията на флуктуацията на светлината в определен момент. Като цяло, тъй като фазовата разлика, която може да се получи, е твърде малка поради тестовия обект (като неоцветената клетка), е трудно да се разграничи, само след като разликата е амплитудата (ясна тъмна разлика), тя може да бъде изтъкнат. Фазовата разлика определя разликата между индекса на пречупване на оптичната вълна през средата и нейната дебелина или равна на разликата в произведението на индекса на пречупване и дебелината (т.е. разликата между оптичния път). Микроскопът за фазова разлика е огледален тест, използващ оптичния път на теста.
Инструментите за изследване на клетъчната биология са диференцирана микроскопия, трансмисионна електронна микроскопия и дизайн на сканираща тунелна електронна микроскопия или измислена Нобелова награда.
Разлика
Микроскопът за фазова разлика има четири специални структури: огледало за фазова разлика, концентратор с въртяща се маса с пръстеновидна апертура, телескоп и зелен филтър. Ефектът на зеления филтър е: намаляване на обхвата на дължината на вълната на осветената светлина, намаляване на фазовата промяна, причинена от различните дължини на вълната на осветената светлина.
Употреби
наблюдавайте несубститирани проби и живи клетки.
Основен принцип
Разликата между разликата в оптичния път на различните части на обекта се преобразува в амплитуда (интензитет на светлината) чрез използване на разликата между индекса на пречупване и дебелината на обекта на различни конструктивни елементи на обекта. Наблюдаваният микроскоп се постига чрез концентриращо огледало с циклична апертура и леща с фазова разлика с фазов лист. Използва се основно за наблюдение на живи клетки или тъканни срезове без скоби, понякога може да се използва и за наблюдение на липсата на контрастно боядисани проби.
превръща оптичната разлика в пътя на видимата светлина през образеца в амбилация, като по този начин увеличава контраста между различните структури, правейки различните структури ясно видими. След като светлината премине през образеца, тя се забавя от първоначалния оптичен път и се забавя с 1/4 λ (дължина на вълната). Ако се увеличи или намали с 1/4 λ, оптичната разлика в пътя става 1/2 λ и двете снимки на лъча се модернизират. Укрепване, амплитудата се увеличава или намалява и контрастът се подобрява. В конфигурацията микроскопът за фазова разлика е различен от 4-те специалности на обикновената оптична микроскопия:
1. Пръстеновидната диафрагма е разположена между източника на светлина и концентратора и действието е да се направи през прожектора Светлината на устройството образува кух конус, кокс към образеца.
2. Фазова плоча (Пръстенообразна фазова плоча) Фазовата плоча, покрита с магнезиев флуорид, може да бъде забавена с фаза 1/4 λ във фазовата плоча, покрита с магнезиев флуорид, което може да забави фазата на директна светлина или дифрактирана светлина. Разделени на две:
(1) a + фазова плоча: забавено директно заснемане 1/4 λ, оптичната вълна след вала на оптичната вълна се добавя, амплитудата се увеличава, структурата на образеца е по-ярка от околната среда, образуват ярка и отрицателен контраст (или отрицателен контраст).
(2) B + фаза: Забавена дифракционна светлина 1 / 4λ, оптичната вълна се изважда след двата комплекта светлинен съвместен вал, амплитудата е малка, образувайки тъмно отражение (или положителен контраст), структурата е повече от околната среда По-тъмно.
3. Телескоп за коаксиално регулиране: Изображението за регулиране на цикличната бленда е напълно съвпадащо с конюгираната повърхност на фазовата плоча.
Ремонт Поддръжка
Няколко проблема при използването на диференцирана микроскопия:
(1) Фазата падна, когато n'n получи яркия и тъмен контраст, Обръщане на фазата. Когато фазовата разлика δ = 0 не се разпознае, тъй като нарастването на увеличението на увеличението на δ се променя, обръщането на фазата ще настъпи, когато δ продължи да се увеличава до определена стойност. Когато обективът е с 90% висока абсорбираща стойност (висок контраст), този преход е около 0,55λ, което е около 0,33 λ при използване на 70% стандартна светлопоглъщаща стойност. Лещата на обектива с по-високи абсорбиращи стойности трябва да се използва за разграничаване на малки оптични пътища.
(2) Ореолът и прогресивният ефект са потъмнени по време на изобразяването на фазовия микроскоп и загубата не е светлина поради забавянето на фазата, но не е загуба на светлина, но светлината е обновена на изображението самолет. Резултатът от разпределението. Следователно, светлината в тъмната област изчезва, ще се появи ярко колело с ореол около по-тъмния обект. Това е недостатъкът на микроскопа с фазова разлика, който затруднява наблюдението на фини структури, когато пръстеновидната диафрагма е тясна и ореолът е по-сериозен. Друг феномен на микроскопа с фазова разлика е асимптотичен ефект и когато фазовата разлика наблюдава същата голяма област, ръбът на региона ще намалее в региона.
(3) Ефект от дебелината на пробата Когато се наблюдава фазата, дебелината на пробата трябва да бъде 5 μm или по-тънка. Когато използвате по-дебели проби, горният слой на пробата е ясен, а дълбокият слой ще бъде замъглен. Неясни и генерират интерференция с фазово изместване и интерференция на разсейване на светлината.
(4) Ефектът на покривното стъкло и предметното стъкло трябва да покриват покривното стъкло, в противен случай светлият пръстен на цикличната бленда и тъмният пръстен на фазовата плоча е трудно да съвпаднат. Частичното наблюдение има високи изисквания за качество на предметните стъкла и покривните предметни стъкла. Когато има драскотина, дебелината на дебелината или неравномерността е неравномерна, създава ярко изкривяване на пръстена и фазова интерференция. Допълнителният слайд е твърде дебел или твърде тънък, което прави пръстеновидния отвор ярък или по-малък.